各位老师、师兄师弟大家好！

我是一名研三在读，目前正在赶毕业论文的实验数据。但在提取乳鼠原代心肌细胞的过程中遇到了严重的瓶颈，实验卡了快一个月了，求各位大神指点：

1. 实验背景： 建立心肌肥大模型，需要提取1-3天内的乳鼠原代心肌细胞进行培养。

2. 具体操作： 采用胰酶+胶原酶II分步消化法，差速贴壁1.5小时以去除成纤维细胞。

3. 核心问题： 细胞接种24小时后，发现死亡率极高（约60%以上）。

   • 贴壁后的细胞形态不规则，且基本观察不到搏动。

   • 即使存活的细胞，状态也很差，完全没法进行后续的药物刺激。

4. 疑惑点： 消化时间我也反复调整过，PBS洗涤也很快，不知道是不是酶浓度的问题，还是血清批次的问题？

眼看论文提交截止日就快到了，心急如焚。如果有做过类似实验的前辈能分享一下经验，或者提供一份稳定的Protocol，感激不尽！